Riassunto analitico
Diverse glicoforme ricombinanti di ormone follicolo-stimolante (FSH) sono disponibili in commercio. Esse vengono utilizzate durante le pratiche di fecondazione assistita (ART). Tuttavia, non è ancora noto se il diverso profilo di glicosilazione possa influenzare la loro attività in vivo.
Lo scopo di questo studio è confrontare in vitro l’azione di due FSH ricombinanti, diversamente glicosilati, nella capacità di attivare le vie di trasduzione del segnale mediate dal recettore dell’ormone (FSHR). Le due molecole testate sono: Gonal-f® (Merck KGaA, Darmstadt, Germania), prodotta in una linea cellulare epiteliale di ovaio di criceto cinese (CHO) e utilizzato quale ormone di riferimento; e Rekovelle® (Ferring Pharmaceuticals, Saint-Prex, Svizzera) prodotta nella linea cellulare PER.C6® derivante da cellule retiniche embrionali umane.
Cellule HEK-293 sono state trasfettate con plasmide portatore del cDNA codificante FSHR e trattate con concentrazioni crescenti di FSH (range 0,0 - 1,0 µM). Mediante metodica bioluminescence resonance energy transfer (BRET) sono stati valutati la formazione di omomeri FSHR-FSHR, l’aumento dei livelli di cAMP intracellulare e l’attività del promotore CRE. Inoltre, è stata valutata la fosforilazione di CREB, mediante SDS-PAGE e Western Blotting.
Considerando che Gonal-f® è una delle molecole più utilizzate in fecondazione assistita, ne è stata valutata la capacità di indurre steroidogenesi in cellule primarie della granulosa umana luteinizzate (hGLC), ottenute da pazienti ART con e senza sindrome dell’ovaio policistico (PCOS). Pertanto, sono stati misurati i livelli di estradiolo (E2), mediante metodica homogeneous time resolved fluorescence (HTRF), prodotti in risposta alla gonadotropina. Gli esperimenti sono stati eseguiti in presenza ed in assenza del flutamide, antagonista del recettore degli androgeni.
Non è stata riscontrata alcuna differenza significativa tra le glicoforme nell’indurre aumento di cAMP intracellulare. Gonal-f® è risultato essere meno potente ma più efficace di Rekovelle® nell’attivare il gene reporter controllato da CRE. Inoltre, dai risultati è emerso che le due glicoforme inducono un diverso pattern di segnale dato dalla formazione degli omomeri FSHR-FSHR. Rekovelle® è risultato più potente di Gonal-f® nell’aumentare i livelli di fosforilazione di CREB.
La condizione di PCOS di donne donatrici di hGLC, non è associata ad uno specifico pattern di risposta al trattamento con Gonal-f®, in termini di produzione di E2, come da confronto con dati ottenuti da donne prive della condizione.
In conclusione, il profilo di glicosilazione di FSH modula l’attivazione della via di trasduzione del segnale cAMP/PKA e gli eventi intracellulari da essa dipendenti. Inoltre, la condizione di PCOS non determina uno specifico pattern nella produzione di estrogeni in risposta a FSH.
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