Riassunto analitico
L’acido ialuronico è un polisaccaride lineare, di origine naturale, appartenente alla classe dei glicosaminoglicani (GAGs). È una molecola che sta riscuotendo un notevole interesse in vari ambiti, tra cui quello medico, farmaceutico e cosmetico grazie alle sue proprietà biologiche e reologiche. In ambito oftalmico è particolarmente apprezzato come componente di gocce oculari nel trattamento della sindrome dell’occhio secco (Dry Eye Disease – DED), per le sue proprietà idratanti e il suo carattere viscoelastico che lo rendono un ottimo agente lubrificante. La DED è un disturbo caratterizzato da un’alterazione del film lacrimale che risulta assottigliato, come conseguenza di una produzione insufficiente di lacrime (ipolacrimia) oppure di un’eccessiva evaporazione lacrimale (dislacrimia). La formula BB, oggetto di questo studio, è un tipo di goccia oculare per il trattamento della DED; si tratta di una soluzione oftalmica a base acquosa sviluppata dall’azienda Enable Innovations S.r.l., presso la quale ho sviluppato il mio progetto di tesi, in cui il componente principale è l’acqua distillata di mirtillo nero (da cui il nome BB - blueberry) e il principio funzionale è l’acido ialuronico, presente in una concentrazione di 0,15 %. L’azienda Enable Innovations S.r.l produce dispositivi medici, i quali sono regolamentati da una normativa diversa rispetto a quella dell’ambito farmaceutico; tuttavia, con l’introduzione del regolamento europeo (UE) 2017/745 (Medical Devices Regulation, MDR), il quale abroga le precedenti normative 93/42/CEE e 90/385/CEE, c’è stato un avvicinamento tra i due mondi, in quanto sono stati introdotti elementi regolatori più stringenti e simili a quelli applicati in ambito farmaceutico. In seguito all’introduzione del regolamento europeo, l’azienda ha deciso di sviluppare e ottimizzare un metodo analitico per la quantificazione del principio funzionale (acido ialuronico) nei prodotti finiti, come ulteriore verifica della qualità del prodotto. In funzione di questa necessità, è nato il progetto di tesi il cui obiettivo era quello di sviluppare un metodo HPLC UV-DAD fruibile in analisi di routine per la quantificazione dell’acido ialuronico in formulazioni oftalmiche a base acquosa. Nella fase iniziale del progetto è stata effettuata una ricerca in letteratura scientifica per verificare la presenza di un metodo HPLC UV-DAD per la quantificazione dell’acido ialuronico. Una volta trovato un metodo che sembrava rispondere alle nostre esigenze, è stato preso come punto di riferimento e sono state effettuate diverse prove di ottimizzazione che ci hanno condotto al metodo finale.
Il metodo sviluppato è stato poi convalidato determinando i seguenti parametri: linearità, accuratezza e precisione, LOD (Limit Of Detection) e LOQ (Limit Of Quantification), ripetibilità e riproducibilità. Tutti i parametri hanno soddisfatto i criteri di validazione. Il metodo sviluppato e convalidato è stato applicato agli studi di stabilità della formula BB per valutare l’andamento della concentrazione del principio funzionale nel tempo. Il metodo è stato applicato anche a formulazioni oftalmiche prodotte da Enable Innovations S.r.l con una concentrazione di acido ialuronico diverso
rispetto a quelle della formula BB, fornendo anche in questo caso ottimi risultati. Possiamo concludere quindi che, in funzione dei risultati ottenuti e delle prove di convalida effettuate, il metodo è efficace per la quantificazione dell’acido ialuronico in soluzioni oftalmiche e che soddisfa gli obiettivi definiti all’inizio del progetto di tesi.
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