Riassunto analitico
Le cellule primarie della granulosa umane (hGLC) regolano lo sviluppo del follicolo ovarico e della maturazione dell’ovocita grazie agli stimoli indotti da gonadotropine e sfingosina-1-fosfato (S1P), presenti nel fluido follicolare. Tali cellule esprimono sia i cinque recettori di S1P (S1PRs) che quelli delle gonadotropine, in particolare dell’ormone follicolo-stimolante (FSH), i quali sono accoppiati a proteina G. Essi mediano una cascata di eventi intracellulari che portano ad attivazione o inibizione di molecole quali extracellular-regulated kinase (ERK1/2), protein kinase B (AKT), phosphoinositide 3-kinase (PI3K) e cAMP, con effetti finali sulla sopravvivenza e proliferazione cellulare. Mentre gli effetti delle gonadotropine sulle cellule della granulosa sono stati ampiamente studiati, le evidenze sugli effetti di S1P sono finora scarse. Con questo studio ho caratterizzato l’attività di S1P e di agonisti selettivi di S1PR1 e S1PR3 (SEW2871 e CYM5541, rispettivamente) in vitro, mediante esperimenti dose-risposta e time-course. A tal fine sono state eseguite anche stimolazioni delle cellule con S1P, SEW2871, CYM5541 in presenza di FSH, in modo da valutare gli effetti sinergici di queste molecole. Gli esperimenti sono stati condotti su hGLC e su una linea cellulare della granulosa immortalizzata (hGL5), precedentemente caratterizzata come tumor-like cell line. L’analisi del cell signalling è stata effettuata valutando la fosforilazione di ERK1/2, AKT e cAMP responsive element-binding protein (CREB) con Western blotting, mentre gli effetti sulla vitalità cellulare sono stati valutati mediante saggio del bromuro di 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT). Gli esperimenti hanno evidenziato un diverso pattern di attivazione del signalling intracellulare quando indotto da S1P o dagli attivatori selettivi di S1PR1 e S1PR3, sia in termini di potenza ed efficacia che di risposta temporale. Gli esperimenti di vitalità cellulare, almeno nelle nostre condizioni sperimentali, non hanno evidenziato effetti significativi. Nel complesso, i nostri risultati gettano le basi per un ulteriore approfondimento del ruolo fisiopatologico di S1P sullo sviluppo del follicolo ovarico e la maturazione dell’ovocita.
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