Riassunto analitico
L’ormone follicolo-stimolante (FSH) è una gonadotropina che media numerosi meccanismi legati allo sviluppo e alla riproduzione. In particolare, nell’ovaio l’FSH innesca eventi steroidogenici e pro-apoptotici, i quali si oppongono a segnali proliferativi ed anti-apoptotici, attivati grazie all’interazione con il suo recettore (FSHR). Ciò dipende dalla capacità del recettore di accoppiarsi a differenti tipi di proteine G. Recentemente, è stato dimostrato che FSHR interagisce con il recettore degli estrogeni accoppiato a proteine G (GPER), formando degli eterodimeri che riprogrammano il signaling mediato da FSHR verso eventi proliferativi fondamentali durante la follicologenesi.
Lo scopo di questo studio è valutare come l’espressione di GPER influisca sul trafficking di FSHR.
Sono state utilizzate cellule HEK293 overesprimenti i due recettori, il mediatore dell’internalizzazione β-arrestina e il marker endosomiale adaptor protein, phosphotyrosine interacting with PH domain and leucine zipper 1 (APPL1). La cinetica di interazione tra FSHR e i due interattori citoplasmatici è stata valutata mediante metodica bioluminescence resonance energy transfer (BRET), in presenza o in assenza di GPER. A tal proposito, le cellule sono state trattate con FSH, o con phosphate-buffered saline (PBS; controllo negativo). L’inibitore della dinamina “Dynasore” è stato opportunamente utilizzato per bloccare il processo di internalizzazione dei recettori. Esperimenti di co-localizzazione dei due recettori, mediante immunofluorescenza e proximity ligation essay (PLA), sono stati eseguiti per confermare i dati BRET.
L’analisi in immunofluorescenza ha identificato co-localizzazione di FSHR e GPER nella membrana cellulare. Inoltre, in cellule esprimenti solo FSHR, l'intensità del segnale data dall’interazione tra recettore e β-arrestina aumenta in seguito a trattamento con FSH. Un simile effetto è stato ottenuto in cellule coesprimenti GPER, suggerendo che la compresenza dei due recettori favorisca il reclutamento della β-arrestina a livello del complesso GPER-FSHR. Invece, il trattamento con Dynasore riduce l’interazione tra FSHR-β-arrestina che, in questa condizione, non cambia in funzione dell’aggiunta dell’ormone. Inoltre, la stimolazione con FSH favorisce l’interazione tra FSHR e APPL1, la quale viene ridotta in presenza di GPER. I dati ottenuti sono stati confermati mediante PLA.
I dati ottenuti mostrano come GPER sia coinvolto nel trafficking di FSHR, regolando negativamente l’interazione FSHR-APPL1 e positivamente quella FSHR-β-arrestina. In conclusione, questo studio può chiarire il ruolo del trafficking di FSHR nella fisiopatologia ovarica.
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