Tipo di tesi | Tesi di laurea magistrale | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Autore | SERPE, VALERIA | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
URN | etd-11142023-142645 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Titolo | Microscopia a due fotoni in immunofluorescenza per l'analisi morfologica del tessuto cerebrale | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Titolo in inglese | Two-photon immunofluorescence microscopy for morphological analysis of brain tissue | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Struttura | Dipartimento di Scienze della Vita | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Corso di studi | Biotecnologie mediche (D.M. 270/04) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Commissione |
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Parole chiave |
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Data inizio appello | 2023-12-15 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Disponibilità | Accesso limitato: si può decidere quali file della tesi rendere accessibili. Disponibilità mixed (scegli questa opzione se vuoi rendere inaccessibili tutti i file della tesi o parte di essi) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Data di rilascio | 2063-12-15 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Riassunto analitico
L’ippocampo è una struttura localizzata nel lobo temporale mediale che ricopre un ruolo critico nelle funzioni mnestiche, visuo-spaziali e cognitive di ordine superiore ed è coinvolta nella generazione di crisi epilettiche. Come per altre aree cerebrali umane, anche per l’ippocampo il livello di conoscenza della sua citoarchitettura risulta essere basso. Lo scopo del mio lavoro di tesi è stato quello di sviluppare e calibrare un metodo di generazione di immagini in fluorescenza ad alta risoluzione di regioni cerebrali estese. Nello specifico, questa ricerca ha come obiettivo quello di investigare il rapporto tra popolazioni inibitorie ed eccitatorie delle regioni ippocampali utilizzando protocolli di immunofluorescenza in combinazione con microscopia a due fotoni. È stato condotto uno studio preliminare su campioni murini dello spessore di 300 um per standardizzare i protocolli biochimici e ottici che potranno essere applicati a tessuti cerebrali umani. Sono stati utilizzati come marcatori l’anticorpo neuronale aspecifico anti-NeuN e l’anticorpo neuronale anti-GAD1 specifico per cellule GABAergiche. Attraverso la combinazione di microscopia a due fotoni e di un algoritmo appositamente sviluppato per l’analisi d’immagine, è stato possibile ottenere informazioni sia sulla localizzazione che sulla densità di popolazione cellulare. L’applicazione di questi metodi sarà in futuro fondamentale per lo sviluppo di modelli computazionali di regioni celebrali umane con risoluzione di singola cellula. |
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Abstract
The hippocampus is a structure located in the medial temporal lobe that plays a critical role in mnemonic, visuo-spatial, and higher-order cognitive functions and is involved in the generation of epileptic seizures. Like other human brain areas, the level of knowledge regarding its cytoarchitecture is low. The purpose of my thesis work was to develop and calibrate a method for generating high-resolution fluorescence images of extended brain regions. Specifically, this research aims to investigate the relationship between inhibitory and excitatory populations in the hippocampal regions using immunofluorescence protocols combined with two-photon microscopy. A preliminary study was conducted on murine samples with a thickness of 300 μm to standardize the biochemical and optical protocols that can be applied to human brain tissues. The non-specific neuronal antibody anti-NeuN and the GABAergic cell-specific neuronal antibody anti-GAD1 were used as markers. Through the combination of two-photon microscopy and a specifically developed image analysis algorithm, it was possible to obtain information on both the location and density of the cell population. The application of these methods will be crucial in the future for the development of computational models of human brain regions at the single-cell resolution |
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