Riassunto analitico
La determinazione dell'Etilglucuronide (EtG) nel capello ha mostrato, rispetto a molti altri biomarkers dell'etanolo, molti vantaggi nel descrivere le abitudini di consumo alcolico di un soggetto. Esso è un metabolita non ossidativo dell'etanolo che può essere rilevato anche dopo settimane o mesi dall'avvenuto consumo alcolico, a seconda della lunghezza dei capelli. Data la sua stabilità in matrice pilifera, l'EtG permette di individuare un uso pregresso di alcol e di definire gli schemi di assunzione del soggetto, incluse ricadute o cessazioni del consumo. La ricerca dell'EtG può essere eseguita su campioni provenienti sia da cadaveri sia da soggetti viventi, con diverse finalità. Nel primo caso serve a determinare le abitudini di consumo nel periodo precedente la morte; nel secondo caso viene effettuata con lo scopo di monitorare il consumo alcolico per stabilire l'idoneità per il trapianto di fegato, l'idoneità alla guida o prevenire dipendenze e malattie alcol-correlate. I valori soglia proposti nel 2013 dalla SoHT (Society of Hair Testing) per l'EtG nei primi 0-6 cm prossimali di campioni di capelli sono 7 pg/mg e 30 pg/mg, rispettivamente per l'astinenza e l'abuso alcolico. Si suppone che alcuni fattori possano influenzare la stabilità e la quantità di EtG rilevabile; tra questi troviamo caratteristiche inter-individuali, trattamenti cosmetici e procedure di preparazione ed estrazione del campione. Nel presente lavoro di tesi è stato validato ed ottimizzato un adeguato metodo analitico per la determinazione dell'EtG in matrice pilifera; il metodo approntato è stato poi applicato a casi di interesse sia forense che clinico. Nel primo caso sono stati analizzati 47 campioni di capelli prelevati da cadaveri risultati positivi all'etanolo nel sangue e con documentata causa di morte e dati anamnestici. L'EtG è risultato positivo in 17 campioni con concentrazioni comprese tra 7 e 352 pg/mg; valori superiori a 30 pg/mg (correlabili ad un frequente abuso alcolico) sono stati riscontrati per il 78% dei soggetti etilisti, per il 50% dei soggetti tossicodipendenti e per il 4% dei soggetti con uso alcolico non noto. I campioni di interesse clinico provenivano da pazienti (n=24) seguiti dai SerT, dal Reparto di Tossicologia Clinica o dalle Commissioni Mediche Locali per l'idoneità alla guida. In caso di adeguata lunghezza del reperto, è stata effettuata l'analisi segmentale del capello, analizzando anche i segmenti intermedi e/o distale. E' stata rilevata positività all'EtG per 11 campioni, con concentrazioni comprese tra 8 e 1856 pg/mg, più elevate nei segmenti prossimali rispetto a quelli distali. Concentrazioni di EtG superiori a 30 pg/mg sono state riscontrate per il 14,3% dei campioni provenienti dai SerT e il 71,4% dei pazienti del Reparto di Tossicologia Clinica. Tutti i campioni provenienti dalle CML sono risultati negativi.
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Abstract
Ethyl glucuronide (EtG) determination in hair shows many advantages in describing drinking habits. EtG is a non-oxidative ethanol metabolite that is detectable in hair for weeks or months, depending on the hair lenght. Because of its stability in hair matrix, EtG analysis enables to identify a previous alcohol consumption and to define the drinking patterns of the subject, including relapses and intake interruption.
EtG analyses in hair can be performed both on postmortem samples and also on samples from living subjects, with different purposes. In the first case EtG analysis aims to determine the drinking patterns before death; in the second case it is used to monitor alcohol consumption, e.g. to determine suitability for liver transplantation, to assess driving skill or to prevent alcohol addiction and alcohol-related disease.
The Society of Hair Testing (SoHT) established in 2013 cut-off values for EtG in the proximal 0-6 cm hair segment: 7 pg/mg for abstinence and 30 pg/mg for alcohol abuse.
Various studies established that EtG stability and EtG levels in hair are influenced by interindividual characteristics, cosmetic treatments and sample extraction techniques.
The aim of this study was to develop and validate a LC-MS/MS method for EtG quantitation in hair; subsequently the proposed method was applied to analyse samples from both forensic and clinical cases.
In the first case, we considered 47 cadavers found positive for ethanol in blood with known anamnestic data. 17 samples were positive for EtG, with concentrations between 7 and 352 pg/mg. EtG values greater than 30 pg/mg were found for 78% of alcoholics, 50% of addicts and 4% of subjects with unknown alcoholic consumption.
The results of hair analyses on 24 clinical cases are reported, too. The samples came from SerT, Unit of Clinical Toxicology (CT) or from Local Medical Committee (CML). In the case of a proper hair lenght, segmental analysis was performed analyzing intermediate and/or distal segments. 11 samples were positive for EtG with concentrations between 8 and 1856 pg/mg; the found levels were greater in the proximal segments than in the distal ones. EtG values greater than 30 pg/mg were found in 14,3% of the SerT samples and in 71,4% of CT samples; conversely, the samples from CML were all negative.
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