Riassunto analitico
Gli oligomeri di recettori accoppiati a proteine G sono emersi come importanti entità fisiologiche con nuove proprietà funzionali e farmacologiche, a causa della difficoltà posta dalla loro flessibilità conformazionale e dalle loro dinamiche, la nostra comprensione dei meccanismi coinvolti nell'oligomerizzazione è ancora incompleta. Il recettore Adenosinico A2A (A2AR) e il recettore Dopaminico D2 (D2R) formano un eteromero ben caratterizzato, il quale gioca ruoli fondamentali nella regolazione delle modalità di signalling dopaminergico nei neuroni striatali. Per incrementare la stabilità dell'eteromero A2AR – D2R per studi strutturali, sono state usate simulazioni di rigid-body docking per identificare le posizioni dove sostituire le cisteine per cross-linkare i protomeri. In questo lavoro sono state valutate le interazioni tra i protomeri di tre paia di A2AR – D2R cys-mutanti tramite bioluminescence resonance energy transfer (BRET). Per D2R(V96C) – A2AR(F70C) è stato ottenuto un marcato incremento di vicinanza tra i protomeri, ciò indica un cross-linking efficace. Inoltre dei nanocorpi, nuove proteine terapeutiche, sono stati testai per verificare il loro ruolo di potenziali intensificatori di stabilità, tuttavia sono necessari ulteriori esperimenti per confermare tale proprietà.
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Abstract
G protein-coupled receptor oligomers have emerged as important physiological entities with novel functional and pharmacological properties, due to the difficulty posed by their conformational flexibility and dynamics, our understanding of the mechanisms involved in oligomerisation is still lacking comprehensiveness. The Adenosine A2A receptor (A2AR) and Dopamine D2 receptor (D2R) form a well-characterised heteromer, playing important roles in regulating dopaminergic signalling modes in striatal neurons. In order to improve stability of the A2AR – D2R heteromer for structural studies, rigid-body docking simulations have been used to identify locations to engineer cysteines to cross-link protomers. In this work, interactions between protomers of three pairs of A2AR – D2R cysteine mutants were assessed by bioluminescence resonance energy transfer (BRET). For D2R(V96C) – A2AR(F70C), a marked increase in protomer proximity was achieved, indicating successful cross-linking. Furthermore nanobodies, novel therapeutics proteins, have been tested to clarify their role as potential stability enhancers, however further experiments are required to confirm such property.
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