Riassunto analitico
La pathway del fosfatidilinositolo 3-chinasi (PI3K)/AKT/mTOR è coinvolta in diversi stati patologici e non, quali sopravvivenza, proliferazione e crescita cellulare, metabolismo, angiogenesi e sviluppo di metastasi.
La protein kinase B (AKT) viene attivata in presenza di opportuni ligandi che possono interagire con diversi recettori tra cui quello (LHCGR) dell’ormone luteinizzante (LH) e gonadotropina corionica umana (hCG). Tale recettore è accoppiato a proteina G e, nella gonade maschile, è espresso in cellule di Leydig dove media la steroidogenesi. A seguito del legame con LH/hCG, viene attivata la proteina Gαs, la quale interagisce con l’adenilato ciclasi e avvia la sintesi di AMP ciclico, mentre la subunità βγ attiva la PI3K, la quale fosforila diversi substrati portando all’attivazione di AKT.
Lo scopo di questo progetto è studiare il ruolo di AKT nella steroidogenesi, mediata da LH e hCG, in cellule murine tumorali di Leydig (mLTC-1) utilizzando diverse metodiche. Tali esperimenti sono stati svolti in cellule trattate con gli ormoni, in presenza e assenza dell’inibitore specifico di AKT, chiamato 3CAI. Ho quindi effettuato il saggio di vitalità cellulare (MTT), mentre la mortalità è stata valutata utilizzando propidio ioduro.
Dai risultati emerge che AKT è fondamentale per up-regolare sopravvivenza cellulare e inibire effetti apoptotici. Tali risultati sono stati confermati mediante bioluminescence resonance energy transfer (BRET), metodica che ha permesso di dimostrare l’aumento del cleavage della caspasi 3 nei campioni trattati con 3CAI. Tuttavia, il trattamento con 3CAI non è associato a ridotta produzione di cAMP mediata da LH/hCG e misurata utilizzando metodiche BRET. Tale risultato è corroborato dal mancato impatto del trattamento con 3CAI sui livelli di progesterone e testosterone mediati da LH/hCG, dal momento che sono eventi dipendenti dal cAMP.
In conclusione, si può affermare che AKT svolga un ruolo fondamentale nella sopravvivenza cellulare mentre non è coinvolta nella modulazione della produzione di progesterone e testosterone, in cellule mLTC-1. Ciò conferma precedenti studi che hanno dimostrato che la steroidogenesi può essere attivata anche durante fasi di abbassamento della vitalità cellulare.
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