Riassunto analitico
La reazione a catena della polimerasi digitale (digital PCR, dPCR) è una tecnologia molecolare innovativa basata sulla suddivisione del campione analitico e sul rilevamento di amplificazioni end-point individuali in compartimenti separati. Tra le numerose opportunità offerte dalla dPCR si trova la capacità di rilevare mutazioni Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) con livelli di sensibilità e precisione senza precedenti. Nel presente lavoro di tesi è stata valutata l'effettiva applicabilità di questa tecnica analitica per quantificare la presenza di uno specifico genotipo vegetale, sia nelle materie prime che nei prodotti trasformati, sfruttando marcatori molecolari basati su SNPs. Come verifica di fattibilità, è stata considerata una filiera di produzione di pasta premium italiana. In particolare, è stato progettato e valutato un test dPCR basato su una mutazione puntiforme caratteristica di una varietà bersaglio di grano duro in campioni prelevati a diversi livelli della filiera. Dai risultati ottenuti, indicano che il saggio possa essere opportunamente applicato per confermare la presenza (quali/quantitativa) di varietà di frumento duro d'interesse in materie prime e prodotti trasformati.
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Abstract
Digital Polymerase Chain Reaction (digital PCR, dPCR) is an innovative molecular technology based on splitting the analytical sample and detecting individual end-point amplifications in separate compartments. Among the numerous opportunities offered by dPCR is the ability to detect Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) mutations with unprecedented levels of sensitivity and precision. In the present thesis work, the effective applicability of this analytical technique to quantify the presence of a specific plant genotype, both in raw materials and in processed products, has been evaluated by exploiting molecular markers based on SNPs. As a feasibility check, an Italian premium pasta production chain was considered. In particular, a dPCR test was designed and evaluated based on a point mutation characteristic of a target variety of durum wheat in samples taken at different levels of the supply chain. From the results obtained, they indicate that the test can be suitably applied to confirm the presence (qualitative / quantitative) of durum wheat varieties of interest in raw materials and processed products.
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