Riassunto analitico
Questo lavoro di tesi sperimentale di laurea in Chimica e Tecnologia Farmaceutiche è stato svolto pressa l’azienda “Diamante Srl Società Benefit” di Verona, società di biotecnologie focalizzata sull'utilizzo delle piante per la produzione di molecole ad alto valore aggiunto. Il lavoro di tesi ha avuto come obiettivo principale lo sviluppo di un protocollo standardizzato e replicabile per la quantificazione delle nanoparticelle di Tomato Bushy Stunt Virus (TBSV), ottenute dalla pianta Nicotiana Benthamiana attraverso tre infezioni, scegliendo il test DAS-ELISA come metodo di quantificazione. Il TBSV è stato scelto come bersaglio della ricerca per la sua rilevanza nel molecular farming. La Nicotiana Benthamiana è stata utilizzata vista la sua sensibilità all'infezione da TBSV che la rende un ottimo modello per studi di patologia vegetale e per la produzione di nanoparticelle. Per raggiungere l’obiettivo di sviluppare un protocollo di quantificazione è stato seguito un workflow sperimentale che ha incluso la selezione degli anticorpi più idonei, l’utilizzo di un software, insieme al metodo del Design of Experiment (DOE), per ottimizzare le condizioni del test, riducendo il numero di prove necessarie e massimizzando l'efficienza. Successivamente, sono stati identificati i parametri ottimali concentrandosi sulle diluizioni dell'anticorpo secondario e sui tempi di incubazione del pNPP. Infine, è stata automatizzato parte del processo utilizzando l'EpMotion®, un sistema di pipettaggio automatico, per migliorare la precisione e la riproducibilità dei dati. Il protocollo ottimizzato ha dimostrato di essere efficace nella quantificazione delle nanoparticelle di TBSV. Le prospettive future includono ulteriori ottimizzazioni del protocollo e l'esplorazione di altri fattori che potrebbero influenzare l'assorbanza nei test DAS-ELISA.
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