Riassunto analitico
Laureanda: Chavely Raisha Mafeudjeu
Relatrice: Prof.ssa Patrizia Tarugi
Correlatrice: Dott.ssa Antonia Lucia Magnolo
Titolo tesi: Nuova mutazione missenso dell’apolipoproteinaB nell’ipobetalipoproteinemia familiare
L’ipobetalipoproteinemia familiare (FHBL) è un disordine autosomico a trasmissione dominante caratterizzato da ridotti livelli plasmatici di colesterolo totale (CT), colesterolo LDL (C-LDL) e apolipoproteina B (apoB). Nel 50% dei casi l’FHBL è dovuta a mutazioni nel gene APOB. La maggior parte delle mutazioni del gene APOB causa di FHBL sono mutazioni nonsenso, delezioni/inserzioni, mutazioni che coinvolgono i siti di splicing. Tutte queste mutazioni determinano lo slittamento della trama di lettura, l’inserimento di un codone di stop prematuro e la formazione di apoB troncate di lunghezza variabile. Ad oggi poche mutazioni missenso sono state descritte come causa di FHBL; esse determinano una ritenzione dell’apoB mutante nel reticolo endoplasmatico o nel compartimento del Golgi riducendo la secrezione delle lipoproteine contenenti apoB.
Nel laboratorio presso cui ho svolto la tesi, in un soggetto con sospetta FHBL è stata identificata allo stato omozigote una nuova mutazione del gene APOB. Si tratta della sostituzione nucleotidica C/T al nucleotide 1594 che comporta la conversione della tripletta CGG codificante l’amminoacido Arginina in posizione 505 con la tripletta TGG codificante l’amminoacido Triptofano (R505W).
Il probando, nato da genitori consanguinei, presentava bassissimi livelli di colesterolo totale e C-LDL; dal punto di vista clinico egli presentava steatorrea.
La variante amminoacidica identificata è localizzata nella porzione ammino-terminale della proteina apoB matura, come le mutazioni missenso descritte in letteratura associate ad FHBL.
L’analisi in silico, eseguita con due differenti software, ha indicato come “potenzialmente dannosa” la variante R505W. Lo screening in 80 soggetti normolipidemici non ha evidenziato la presenza di alcun soggetto portatore.
Per studiarne l’effetto funzionale la sostituzione nucleotidica C/T è stata introdotta mediante mutagenesi sito-diretta in un vettore di espressione (pCMV-5) contenente il cDNA codificante l’apoB-48 umana. Cellule di epatoma di ratto (McA-RH7777) sono state trasfettate in modo transiente con l’apoB-48 umana normale e mutata.
L’effetto biologico del mutante R505W è stato determinato valutando la sintesi, l’espressione e la secrezione dell’apoB-48 mutata negli epatociti.
L’effetto della mutazione R505W sull’efficienza di secrezione dell’apoB-48 umana è stata determinata nei mezzi mediante western blot.
Sulla base degli studi di espressione possiamo affermare che la mutazione R505W provoca una ridotta secrezione dell’apoB-48 mutata rispetto alla proteina normale.
Anche i genitori sono risultati portatori eterozigoti della variante.
Lo studio fornisce una prima evidenza che la mutazione R505W, localizzata nel dominio ammino terminale della proteina apoB, possa essere causa di FHBL. Studi futuri saranno necessari per validare l’effetto patogenetico della variante amminoacidica oggetto di studio.
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