Riassunto analitico
La presente Tesi Sperimentale di Laurea Magistrale in Farmacia è il risultato di uno studio realizzato con la collaborazione della professoressa Francesca Vezzalini e il gruppo di ricerca Phytopharms rappresentato dal professor Víctor López Ramos e dalla professoressa Carlota Gómez Rincón. Il progetto è stato svolto presso il Dipartimento di Scienze della Salute della Universidad San Jorge (Saragozza, Spagna), nell’ambito del progetto di mobilità Erasmus+ (coordinatrice prof.ssa Federica Pellati).
Lo studio nasce dall’esigenza di fare fronte ad un problema di salute pubblica dovuto al parassita appartenente alla specie Anisakis che popola abitualmente l’apparato digerente di pesci, molluschi e mammiferi marini. L’uomo, nutrendosi di prodotti ittici crudi o malcotti, incarna l’ospite accidentale dell’Anisakis che giunto nell’intestino (allo stadio larvale L3) non riesce ad ultimare il ciclo vitale e muore. L’infezione nell’uomo può creare disturbi di natura gastrointestinale (dolori addominali, diarrea, vomito) fino a perforazione di stomaco od intestino.
Nel tentativo di prevenire i casi di infezione umana e l’uso di agenti chimici deleteri per l’ambiente e per la salute umana, è necessario rivolgere l’attenzione allo sviluppo di nuovi e più sicuri controlli sull’alimentazione e verso l’impiego di prodotti di origine naturale (Abushelaibi A.A. et al. 2012, Negi P.S. et al. 2012). In letteratura molti studi riportano l’effetto larvicida di alcune piante e oli essenziali (Valero A. et al. 2015). In particolare, la presente tesi sperimentale si focalizza sulla pianta di Helichrysum stoechas (L.).
Pertanto lo scopo di questo studio consiste in:
1. Identificazione e valutazione in vitro dell’attività antielmintica della pianta di Helichrysum stoechas (L.) contro il parassita Anisakis.
2. Analisi statistica dell'effetto dell'Helichrysum sulla qualità di moto delle larve.
3. Valutazione in vitro della capacità della pianta di Helichrysum stoechas (L.) di ridurre la capacità infettiva delle larve di Anisakis tramite il test di resistenza acida.
4. Analisi in vitro della capacità di penetrazione dell’agar, trattato in modo da riprodurre lo status fisiologico del tratto gastrico, da parte di Anisakis larvae.
5. Determinazione dell'attività acetilcolinesterasica in un gruppo di larve trattate rispetto al controllo al fine di valutare un possibile meccanismo d'azione dell’Helichrysum legato all'inibizione dell'enzima AChE.
I risultati ottenuti dimostrano che la pianta presenta un'attività larvicida, a dosi relativamente basse, influenza la qualità di moto delle larve ed è in grado di ridurre la loro penetrazione nello stomaco così come la resistenza a pH acidi del tratto IG. Per quanto riguarda il meccanismo d'azione come inibitore dell'AChE, invece, gli studi effettuati non sono stati completati per poter confermare l'ipotesi.
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Abstract
This Experimental Pharmacy Degree Thesis is the result of a study carried out with the collaboration of Professor Francesca Vezzalini in the laboratory of Professor Víctor López Ramos in close collaboration with Professor Carlota Gómez Rincón at the Department of Health Sciences of the Faculty of Pharmacy of the Universidad San Jorge (Zaragoza, Spain), within the framework of the Erasmus+ mobility project (coordinator Professor Federica Pellati). The study focuses on a public health problem caused by the parasite belonging to the Anisakis simplex species that habitually inhabits the digestive system of fish, molluscs and marine mammals. Humans, by feeding on raw or undercooked fish products, embody the accidental host of Anisakis, which upon reaching the intestine (at the L3 larval stage) is unable to complete its life cycle and dies. Infection in humans can create gastrointestinal disorders (abdominal pain, diarrhoea, vomiting) up to perforation of the stomach or intestine.
In an attempt to prevent human infection and the use of chemical agents that are deleterious to the environment and human health, attention must be turned towards the development of new and safer food controls and towards the use of products of natural origin (Abushelaibi et al. 2011, Negi P.S. et al. 2012). In the literature, many studies report the larvicidal effect of certain plants and essential oils (Valero A. et al. 2015). In particular, this experimental thesis focuses on the Helichrysum stoechas (L.) plant.
Therefore, the aim of this study consists of:
1. Identification and in vitro evaluation of the anthelmintic activity of the Helichrysum plant against the larvae Anisakis spp.
2. Statistical analysis of the effect of Helichrysum stoechas (L.) on the motion quality of larvae.
3. Analysis in vitro of the penetration capacity of agar, treated to reproduce the physiological status of the gastric tract, by Anisakis spp.
4. Determine whether the extract reduces the infecting capacity of the larvae through the acid resistance test.
5. Determination of acetylcholinesterase activity in a group of treated versus control larvae in order to evaluate a possible mechanism of action related to enzyme inhibition.
The results obtained show that the plant exhibits larvicidal activity, at relatively low doses, influences the motion quality of the larvae and is able to reduce their penetration into the stomach as well as their ability to resist acidic gastric environments. Concerning the mechanism of action as an AChE inhibitor, however, the studies and assays performed were not sufficient to confirm the hypothesis.
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