Riassunto analitico
La gonadotropina corionica umana (hCG) e l'ormone luteinizzante (hLH) sono due ormoni glicoproteici caratterizzati da una subunità alfa comune e una subunità beta unica, legate tra di loro non covalentemente. Espletano le loro funzioni legandosi ad un comune recettore di membrana dimerico/oligomerico (LHCGR). Per molti anni, hLH e hCG sono stati considerati due ormoni equivalenti dal punto di vista biologico. Nonostante ciò, molte sono le evidenze che LHCGR medi differenti risposte cellulari in base al tipo di ligando. In cellule primarie della granulosa, la stimolazione da parte di hLH e hCG comporta una differente attivazione di vie di trasduzione del segnale, espressione genica e steroidogenesi. L'obiettivo del presente studio è quello di comparare l'azione di hLH e hCG in cellule primarie di Leydig murine, fisiologicamente esprimenti il recettore murino lhcgr, andando a valutare l'attivazione delle vie di trasduzione del segnale che coinvolgono cAMP/PKA ed ERK1/2. I testicoli di topi C57BL6 di 3-5 mesi sono stati asportati, digeriti meccanicamente ed enzimaticamente, e le cellule interstiziali di Leydig sono state isolate tramite gradiente di Percoll. Le cellule così isolate sono state trattate con dosi crescenti di hLH e hCG (1 pM - 100 nM) ed è stata valutata la produzione di cAMP totale dopo 3 ore e la fosforilazione di ERK1/2 dopo quindici minuti tramite ELISA e Western blotting, rispettivamente. Per valutare l'accumulo di cAMP, le stimolazioni sono state svolte in presenza di 500 μM di IBMX (phosphodiesterases inhibitor 3-isobutyl-1-methylxanthine). Dagli esperimenti dose-risposta è emerso che hCG è circa 10 volte più potente rispetto ad hLH nell’indurre la produzione di cAMP totale (hCG EC50: 18.64±10.14 pM; hLH EC50: 192.00±53.96 pM; Mann-Whitney’s U-test, p<0.05, n=4), nelle cellule murine di Leydig. hCG risulta essere più efficace anche nel promuovere la fosforilazione di ERK1/2 rispetto ad hLH. Il presente studio dimostra che in cellule primarie di Leydig murine l'lhcgr murino media un accumulo di cAMP totale e un'attivazione della fosforilazione di ERK1/2 differente a seconda che il ligando sia hLH o hCG.
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