Riassunto analitico
La sindrome da iperstimolazione ovarica(OHSS) è una complicanza clinica che può colpire donne sottoposte a trattamenti ormonali durante i protocolli di fecondazione assistita.Esiste anche una forma spontanea della patologia (sOHSS) che si presenta principalmente in donne in gravidanza e non è legata alla somministrazione di gonadotropine esogene. sOHSS si manifesta con cisti ovariche, ascite, distensione e dolore addominale. I principali meccanismi patogenetici attualmente individuati sono l'aumento dei livelli di gonadotropine e TSH endogeni, che possono mimare l'azione dell'FSH, oppure la presenza di mutazioni nel gene del recettore dell'ormone follicolo stimolante (FSHR). In questo studio sono stati presi in esame i casi di tre pazienti con sOHSS, in cui è stata ritrovata la stessa, nuova mutazione Asn106->Hys in eterozigosi. Inoltre, una di queste pazienti portava anche la mutazione Ser128->Tyr in eterozigosi. Entrambe queste mutazioni sono localizzate nel dominio extracellulare di FSHR, in particolare nel sito di interazione con il ligando, implicando una possibile cross-reattività del recettore con altri ormoni. Lo scopo di questo studio in vitro è confrontare il cell signaling mediato da FSHR mutati con quello mediato dal recettore “wild type” (wt), al fine di valutarne la connessione con sOHSS. Sono stati generati tre diversi FSHR mutati mediante mutagenesi, il primo avente la mutazione Asn106->Hys, il secondo Ser128->Tyr e il terzo avente entrambe le mutazioni. L'espressione di tali recettori mutati e del recettore wt è stata ottenuta a seguito di trasfezione di cellule HEK 293. L'attività funzionale dei recettori è stata valutata misurando la produzione di cAMP, in seguito a stimolazione con dosi crescenti di FSH, LH, hCG e TSH ricombinanti. L'aumento di cAMP intracellulare è stato valutato mediante tecnica bioluminescence resonance energy transfer (BRET), utilizzando specifici biosensori, mentre i livelli di espressione dei diversi recettori nelle cellule trasfettate sono stati valutati mediante Western blotting. I risultati ottenuti mostrano come la stimolazione con FSH induca, in cellule HEK 293 trasfettate con FSHR wt o con mutanti, un aumento di cAMP intracellulare.Tuttavia, FSHR Asn106->Hys e FSHR Asn106->Hys+Ser128->Tyr sono associati a minore sensibilità a FSH rispetto a wt. Inoltre, FSHR Ser128->Tyr è in grado di mediare aumento di cAMP intracellulare anche in seguito a stimolazione con hCG e, in maniera addirittura maggiore, con LH. L'analisi mediante Western blotting dei recettori wt e mutati mostra un egual livello di espressione a livello cellulare. Questo studio dimostra che le mutazioni Asn106->Hys e Asn106->Hys+Ser128->Tyr di FSHR non correlano con sOHSS, ma esistono fenomeni di cross-reattività tra FSHR Ser128->Tyr e le gonadotropine hCG e LH. Tuttavia, tale mutazione è presente in associazione a Asn106->Hys nei tre casi presi in esame, non permettendo di caratterizzarne lo specifico effetto in vivo. Dai risultati ottenuti si evince che la mutazione Asn106->Hys possa correggere eventuali fenomeni di cross-reattività tra hCG/LH e il mutante FSHR Ser128->Tyr.
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