Riassunto analitico
Lo scopo di questo lavoro di tesi è stato la determinazione quantitativa degli isoflavoni di soia in integratori alimentari, mediante 13C-qNMR.
Gli integratori sono regolamentati dalla DIRETTIVA 2002/46/CE che all'art. 8 prevede che: “La quantità delle sostanze nutritive o delle sostanze aventi un effetto nutritivo o fisiologico contenuta nel prodotto è espressa numericamente sull'etichetta” e che “Le quantità delle sostanze nutritive o altre sostanze dichiarate si riferiscono alla dose giornaliera di prodotto raccomandata dal fabbricante quale figura nell'etichetta” ed infine all'art. 9 che “I valori da riportare ai sensi dell’articolo 8, paragrafi 1 e 2, sono i valori riscontrati dal fabbricante nell'analisi della composizione media”. Questo generico riferimento comporta che esistano margini di tolleranza per i contenuti degli integratori alimentari decisamente più ampi rispetto a quanto accade ad esempio per i farmaci, arrivando fino a decine di unità percentuali per i nutrenti. Per questo motivo, l’attenzione si è focalizzata nella messa a punto di un metodo analitico che utilizzasse la risonanza magnetica del carbonio, che risultasse meno elaborato e più veloce rispetto alle metodologie classiche separative di solito utilizzate in laboratorio per questo tipo di controlli. In seguito all'estrazione, i campioni sono stati pertanto quantificati grazie all'uso del metodo qNMR ERETIC2 (Electronic Reference To access In vivo Concentrations). Questo metodo si basa sull'utilizzo di uno standard esterno, utilizzabile per tutte le molecole presenti a prescindere dalla loro natura, acquisito separatamente senza l’utilizzo di uno standard interno che possa interferire con i campioni da esaminare e senza la necessità di costruire curve di calibrazione. Il lavoro ha dovuto prevedere una prima completa caratterizzazione NMR dei campioni, per la selezione dei segnali aventi le caratteristiche richieste per la quantificazione e successivamente, la verifica strumentale mediante HPLC/MS delle molecole individuate e quantificate nei campioni.
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