Riassunto analitico
Gli ormoni follicolo-stimolante (FSH), luteinizzante (LH) e la gonadotropina corionica umana (hCG) sono gonadotropine impiegate da tempo per la stimolazione ovarica in riproduzione assistita. Sebbene sia possibile ottenere ormoni ricombinanti, alcuni di questi farmaci consistono in molecole purificate da urine di donne in menopausa (hMG), contenenti quindi FSH ed LH, e addizionate di hCG. Le varie tipologie di hMGs si differenziano in base alla composizione, glicosilazione degli ormoni che le compongono e ai metodi di purificazione. In questa tesi sono stati confrontati i farmaci hMG Menopur® e Meriofert®, valutandone la capacità di indurre aumento intracellulare di cAMP, nel reclutamento di β-arrestina 2 e la sintesi di progesterone ed estradiolo in vitro.
A tale scopo, la linea cellulare HEK293 è stata indotta ad over-esprimere il recettore dell’FSH (FSHR) e/o di LH/hCG (LHCGR), mediante trasfezione. L’accumulo di cAMP e il reclutamento della β-arrestina 2 sono stati valutati utilizzando Bioluminescense Resonance Energy Transfer (BRET), così come la formazione di omo/eteromeri tra FSHR e LHCGR, mentre gli steroidi progesterone ed estradiolo sono stati misurati nel terreno di coltura di cellule della granulosa primarie umane (hGLC), naturalmente esprimenti i recettori delle gonadotropine, mediante immunoassay.
I dati in vitro ottenuti suggeriscono che un diverso rapporto tra le concentrazioni di FSH, hCG e LH, caratterizzanti i farmaci commerciali Menopur® e Meriofert®, influisce sulla conformazione del complesso eteromerico FSHR-LHCGR e sulle vie di trasduzione del segnale intracellulari. Tali farmaci inducono quindi segnali specifici che potrebbero essere utili per sviluppare nuovi approcci clinici di terapia personalizzata.
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