Riassunto analitico
L’ormone follicolo-stimolante (FSH) e l’ormone luteinizzante (LH) sono due gonadotropine che svolgono un ruolo essenziale nello sviluppo e nella riproduzione. Nelle donne in età fertile, durante la follicologenesi, la crescita dei follicoli ovarici è comunemente attribuita all’attività proliferativa dell’FSH, che agisce in concerto con l’LH e gli estrogeni. FSH e LH agiscono legandosi esclusivamente a recettori di membrana accoppiati a proteina G (GPCR), chiamati FSHR e LHCGR mentre gli estrogeni a due recettori nucleari ed un GPCR (GPER). Questi recettori sono co-espressi sulla membrana delle cellule del follicolo ovarico, almeno durante le prime due settimane del ciclo mestruale. In seguito al legame dell’estrogeno estradiolo con GPER, viene attivata la proteina Gαi, la quale inibisce la produzione di cAMP ed induce la fosforilazione di ERK1/2. L’azione di FSH attiva la proteina Gαs, quindi vie di trasduzione del segnale che mediano eventi steroidogenici e pro-apoptotici, ma anche proliferative ed anti-apoptotiche β arrestina/ERK1/2- e AKT-mediate. Elevati livelli di espressione di FSHR sono associati alla predominante attivazione delle pathways steroidogeniche e pro-apoptotiche, in vitro. Lo scopo di questo studio è valutare il livello di interazione tra FSHR e GPER a livello della membrana cellulare, e se l’aumento dei livelli di espressione di FSHR sia associato a modulazione del coupling con gli interattori citoplasmatici. Quantità crescenti di FSHR e/o GPER (25, 50, 100, 200 ng) sono stati trasfettati in transiente nella linea cellulare HEK293, quindi, ho valutato la dimerizzazione tra FSHR e GPER, e il coupling di FSHR con proteine G e β arrestina 2 mediante Bioluminescence resonance energy transfer (BRET). Tale metodo ha permesso di valutare l’interazione tra le molecole in funzione dei livelli di espressione delle stesse. L’effetto della presenza di GPER sulla capacità di accoppiamento tra FSHR e proteina Gαs è anche stato analizzato. Gli esperimenti BRET hanno dimostrato per la prima volta che FSHR e GPER interagiscono tra di loro, a livello costitutivo, formando dei dimeri sulla superfice cellulare. La valutazione del coupling tra recettore e proteina Gαs aumenta proporzionalmente alla quantità del recettore espresso, rivelando che ad alte concentrazioni di FSHR affinità e specificità di legame sono maggiori. Non sono state osservate differenze significative nel coupling, nell’affinità e nella specificità tra FSHR e le proteine Gαq, Gαi e β arrestina 2. GPER è in grado di sottrarre la proteina Gαs dall’interazione con FSHR in maniera concentrazione-dipendente. Pertanto, tali risultati confermano il potenziale pro-apoptotico mediato da elevati livelli di espressione di FSHR in vitro. Inoltre, la co-espressione di GPER e FSHR sembra modulare negativamente il coupling tra FSHR e la proteina Gαs, quindi potenzialmente la pathway steroidogenica. Tali dati suggeriscono che l’interazione tra FSHR e GPER svolga un ruolo nella selezione follicolare.
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